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高温灭菌操作中常见错误的分析

高温灭菌是指用热能杀死微生物。其原理是高温使原生质中的蛋白质变性、使酶失活,致使微生物死亡。高温灭菌主要有高压蒸汽灭菌法、干热灭菌法和灼烧灭菌法几种。如果操作不当,即达不到预期的灭菌效果。现就常见错误分析如下:
1、高压蒸汽灭菌
蒸汽灭菌属湿热灭菌,由于湿热灭菌有潜能存在,被灭菌物体的温度比蒸汽的低,蒸汽在其表面凝结成水,放出潜能,可迅速提高被灭菌物体的温度。又由于水和水蒸汽比空气的热容量大、导热快、穿透力强,所以,与干热灭菌相比,灭菌需要的温度低、时间短。由于高压蒸汽灭菌法水蒸汽的温度随其所受压力的增加而升高,因而灭菌用的高温蒸汽都是通过加压获得的。
高压灭菌锅操作中常见的错误有:
(1)排气不彻底。在升压前应将锅内冷空气排净,因空气是热不良导体,若不排净,冷空气就会聚集井滞留在灭菌锅中消毒筒的中下部,围绕在待灭菌物的周围。在这种情况下,假若锅内仅排除一半空气,当压力表指针达到105Pa时,锅内实际温度仅能达到112℃,比要求的121℃低9℃之多,将导致灭菌不彻底,可能造成大面积染菌。(自动的高压灭菌锅上下排气阀都要打开然后加热排空气)
(2)排气软管没有按要求插入灭菌筒的下部,或排气软管断裂、缺失。灭菌锅内的冷空气是通过排气软管排出的,上述情况将造成灭菌筒外的蒸汽直接经排气阀排出锅外,灭菌锅内的空气排放受阻。
(3)消毒筒内物品堆积太紧、太满,阻碍蒸汽的流通和热交换,使容器内升温减慢,造成物体内部杀菌不完全。
(4)升温过快。灭菌的时间是以达到要求温度后的持续时间计算的,但温度的升降过程同样起到杀菌的作用,升降温度过快会通过影响总的积温而影响灭菌效果。另外,升温过快,特别是使用外源蒸汽的情况下,会造成被灭菌物体内部升温滞后于压力表指示温度。
(5)灭菌的物体体积(容量)过大。组织培养中或常规微生物实验中,高温蒸汽灭菌通常要在121℃(即蒸汽压力为1kg/c㎡或5磅/寸2,或0.105MPa)下保温15min。这一规定仅适用于试管、三角瓶中小于200ml容量的。若体积太大,特别是固体培养基,会造成灭菌不彻底,应适当延长灭菌时间。
(6)任意延长灭菌时间。规定的灭菌温度和时间是经过科学试验确定的,只要按照正确的灭菌程序是能达到灭菌目的的。但在实践中常有人为了“保证彻底灭菌”而任意延长灭菌时间。这样忽视了杀菌过程中温度对培养基成分的破坏作用,是得不偿失的。
(7)温度不稳定。灭菌过程中温度(压力)忽高忽低,特别是手提式电能灭菌锅,它没有控温装置,难于控温。操作者可配置调压变压器,通过调节电压控温。此外,还常遇到灭菌锅内加水太少(应加2~3L);容器内装的溶液量过多(应少于2/3);安全阀失灵等问题。
2、干热灭菌
干热灭菌指在烘箱160℃温度下,维持2h,消除物体上的微生物的方法。常见错误有:
(1)将灭菌物品(如培养皿)堆摞放置,且堆得过满、过挤,阻碍空气流通和热量的传递、交换;
(2)升温时不打开箱顶通风孔,影响箱内冷空气及水汽的排除;
(3)高温(80℃以上)下开箱取物,热蒸汽喷出造成烧伤及突然降温,使玻璃器皿破裂;
(4)温度过高(180℃以上)造成包装纸、棉塞焦化,失去防菌或过滤作用;
(5)将不耐热的枪头、离心管、试管帽、滤器等塑料制品放入烤箱内灭菌,而致熔化。
3、灼烧灭菌
即直接利用火焰将微生物灼烧致死。特点:简便、迅速、彻底。主要用于接种工具及器皿的灭菌。如接种杯、镊子、剪刀、玻棒、瓶口及其封口用的铝箔的灭菌常见的错误有:
(1)接种工具的灭菌范围不够,如长度不够,灼烧时没有旋转造成内外侧灭菌不匀;
(2)接种工具没有降至常温即用于接种;
(3)对玻璃器皿灼烧过度,使棉塞、封口膜焦化或熔化。

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